Mini Ensaio De Meia F Cil De Fazer

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Clonar-se em semifluido um ágar-ágar de ágar-ágar. É possível aplicar um ágar-ágar semifluido à clonagem de hybridomas. Normalmente o sistema composto de duas camadas empreende. A mais baixo (firme) camada contém o ágar-ágar de 0,5% por ágar-ágar no ambiente do cultivo. Para ele permitem endurecer-se. Então acrescente a segunda camada – o suave, contendo ágar-ágar de ágar-ágar de 0,3% que junta as jaulas clonadas. Usando jaulas da camada alimentícia semeiam-se na xícara de Petri antes de encher um ágar-ágar de ágar-ágar, e o ambiente do cultivo elimina-se justo antes da adição da camada mais baixa de um ágar-ágar.

Em  = 1 f (= 0,3 para receber a probabilidade razoável só de um clone em um buraco, em mais de 37% de buracos não deve ser crescimento observado de jaulas. Como a eficiência da clonagem raramente acontece 100% iguais, as jaulas têm de semear-se na densidade de 10, 3 e 0,5 jaulas em um buraco. Aquelas pastilhas sobre as quais o crescimento na metade de buracos se observa, contêm os clones isolados.

Há duas opções principais da adição do PINO, agora no uso. O primeiro um método compõe-se no seguinte. Dentro de 1 minuto acrescentam 1 ml de 50% da solução de PINO em 370 C com contínuo picar. Então a solução dilui-se gradualmente a 10 ml dentro de vários minutos na quarta-feira sem soro então centrifugadora de jaulas e resuspendirut no ambiente do cultivo.

Além disso em certo quarto é desejável ter uma geada profunda em - 700 C e um navio de Dewar com o nitrogênio líquido do armazenamento de jaulas. Para receber hybridomas é necessário também adquirir o artigo plástico especial para a cultura de jaulas: pastilhas 96-lunochny com um fundo chato, pastilhas 24-lunochny, garrafas com uma área da altura de 25, 75 cm2, etc., artigo plástico para executar immunofermental e rádio-análises imunológicas, ambientes de cultivo, reagentes necessários, o soro de fruto de uma vaca (FSC).

Um de problemas da engenharia celular compõe-se na criação de sistemas celulares com novas propriedades com base em interações celulares. Agora os métodos de imunização fora de um organismo melhoram-se e os mecanismos da ativação de V-lymphocytes estudam-se. É especialmente importante para receber anticorpos monoclônicos da pessoa.

No processamento mais longo de uso do segundo método de jaulas CAVILHAM a solução. 30-35% do PINO acrescentam-se a um depósito de jaulas na temperatura ambiente. Centrifugadora de jaulas 2 minutos, então eles partem na temperatura ambiente para 5-7 minutos. Então dividem-se no grande volume do ambiente com o soro, lavaram e cultivaram.

Escolha de um animal experimental. Normalmente para a imunização usam ratos e ratos. Une-se com que as jaulas miyelomny convenientes de ratos e ratos são comuns e, além disso, não representa o cultivo de dificuldades do hybridomas recebido em um organismo destes animais.